Esclerosis Múltiple: Subtipos Celulares y Enfermedades Inflamatorias
Subtipos Celulares y Enfermedades Inflamatorias
Resumen objetivo elaborado
por el Comité de Redacción Científica de SIIC sobre la base del artículo
Long-term use of Interferon-ß in Multiple Sclerosis Increases Vδ1–Vδ2–Vγ9– γδ T Cells that are Associated with a Better Outcome
de
Maimaitijiang G, Watanabe M, Kira J y colaboradores
integrantes de
Kyushu University, Fukuoka, Japón
El artículo original, compuesto por 15 páginas, fue editado por
Journal of Neuroinflammation
16(1):1-15, Sep 2019
El interferón beta representa una terapia modificadora de la enfermedad empleada para el tratamiento de la esclerosis múltiple, con numerosos efectos pleiotrópicos en el sistema inmunitario periférico.
Introducción
La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria del sistema nervioso central, caracterizada por desmielinización de las fibras nerviosas. Las células T autorreactivas median la patogénesis de esta enfermedad, y pueden ser divididas en células γδ y αß. Las primeras expresan el receptor de células T (TCR) γ y cadenas δ, mientras que las segundas expresan TCR α y cadenas ß.
Las células T γδ estarían involucradas en numerosas enfermedades inflamatorias, aunque su población es < 5% de los linfocitos periféricos. En la EM, estas células se encuentran aumentadas en la sangre y el líquido cefalorraquídeo, y están presentes en lesiones cerebrales activas crónicas. Se informó que una deleción en la variación del número de copiado en el TCRα y el loci γ aumentan la susceptibilidad a la EM. Sobre la base de estos datos, se planteó la hipótesis de que una desviación en el rearreglo en el gen del TCRγδ contribuye a la patogénesis de esta enfermedad.
Se realizaron estudios de inmunofenotipificación por citometría de flujo en pacientes con EM no tratados, y se encontró que los porcentajes de Vδ2+ y Vδ2–Vγ9+ en células T γδ disminuyeron, y que el cociente Vδ1/Vδ2 se incrementó comparado con pacientes sanos. En este estudio, las células T γδ Vδ2+Vγ9+ tuvieron una correlación negativa con la discapacidad y una correlación positiva con los porcentajes de células T reguladoras (Treg) en células CD4+, lo que da idea del papel protector de estas células.
El interferón β (IFN-beta) representa un tratamiento modificador de la enfermedad (TME) empleada para el tratamiento de la EM, con numerosos efectos pleiotrópicos en el sistema inmunitario periférico, que incluyen la reducción de las células T colaboradoras (Th) Th1 y Th17, e incrementan las células Treg productoras de interleuquina (IL)-10, las que se cree son beneficiosas para esta enfermedad. Este fármaco, además, incrementó las células B productoras de IL-10 beneficiosas y disminuyó las células B de memoria.
El objetivo de este trabajo fue investigar los cambios fenotípicos de células T γδ por el tratamiento con IFN-beta asociado con efectos terapéuticos en la EM.
Metodología
Se incorporaron 35 pacientes con EM no tratada, 21 pacientes con EM tratada con IFN-beta y 44 controles sanos. Los pacientes con EM tenían un resultado negativo para el anticuerpo anti-acuaporina 4 y se encontraban en la fase de remisión. La gravedad de la enfermedad se puntuó con las escalas MS Severity Score (MSSS) y Expanded Disability Status Scale (EDSS). Los pacientes no tratados no recibieron TME ni corticosteroides por al menos 6 meses. Los pacientes tratados fueron separados en dos grupos de acuerdo con la ausencia de actividad de la enfermedad (grupo NEDA [no-evidence of disease activity]) y con evidencia de actividad de la enfermedad (grupo EDA [evidence of disease activity]).
Se recolectó sangre periférica y se aislaron las células mononucleares. Estas células fueron teñidas con 12-miristato-13-acetato de forbol e ionomicina. Se emplearon anticuerpos monoclonales anti-humano conjugados con fluorocromo para CD3, CD8, CD14, CD19, TCRγδ, TCRVδ1 y TCRαß, entre otros. Estas células teñidas fueron analizadas con un citómetro de flujo.
Las variables categóricas fueron descritas mediante porcentajes y recuentos, mientras que las variables continuas fueron descritas por medianas. Se empleó la prueba de Wilcoxon para comparar cada subtipo celular entre grupos.
Resultados
Al momento de analizar los subtipos de células Vδ1+Vδ2+ y Vδ1–Vδ2– entre pacientes no tratados, tratados y controles sanos, su porcentaje varió significativamente entre grupos (p < 0.001). El porcentaje de células Vδ2– fue significativamente menor en pacientes no tratados y en sujetos tratados, en comparación con los controles sanos (p = 0.047 y p < 0.001, respectivamente). Las célulasVδ2–Vγ9– fueron significativamente menores en los pacientes no tratados y tratados (p = 0.043 y p < 0.001, respectivamente). Además, los porcentajes de células Vδ2+ y Vδ2+Vγ9+ fueron significativamente menores en los pacientes tratados que en aquellos no tratados. Asimismo, el porcentaje de células Vδ1–Vδ2– fue significativamente superior en los pacientes tratados que en los individuos no tratados y en los controles sanos (p = 0.002 y p < 0.001, respectivamente). El porcentaje de células Vδ1–Vδ2–Vγ9– de los pacientes tratados fue superior al de los pacientes no tratados y los controles sanos (p = 0.002 y p < 0.001). Al comparar entre pacientes tratados y controles sanos, se encontró que el recuento fue superior en los primeros respecto de los segundos (p = 0.009). Estos resultados sugieren que el IFN-beta incrementó el porcentaje de células Vδ1–Vδ2–Vγ9– y disminuyó el porcentaje de células Vδ2+.
El porcentaje de células B de memoria fue diferente entre los grupos. Los porcentajes de células B de memoria y las de memoria de clase cambiada disminuyeron en los pacientes tratados, mientras que no variaron en los pacientes no tratados. Los porcentajes de células B de memoria de clase cambiada fueron menores en los sujetos tratados y tendieron a ser menores en pacientes no tratados, en comparación con los individuos sanos (p < 0.001 y p = 0.058). Estos resultados sugieren que el tratamiento con IFN-beta disminuye el porcentaje de células B de memoria, especialmente las de clase cambiada.
Al comparar entre los pacientes NEDA y EDA tratados, se encontró que los porcentajes de células Vδ2+ y Vδ1+Vδ2+Vγ9+ fueron similares entre estos grupos, pero significativamente menores que en los sujetos sanos (p < 0.05 en todos los casos), mientras que los porcentajes de Vδ2– y Vδ1–Vδ2–Vγ9– fueron significativamente superiores que en los sujetos sanos (p < 0.033 en todos los casos). Estos subtipos celulares no tuvieron diferencias significativas entre los pacientes NEDA y EDA.
Al comparar entre los grados de gravedad se encontró que, en los pacientes no tratados, los porcentajes de células Vδ2– y Vδ1–Vδ2–Vγ9– se correlacionaron de forma negativa con los puntajes de la EDSS, mientras que en los pacientes tratados esta correlación no existió.
Al comparar los porcentajes de células T y B en pacientes con EM remitente-recurrente (EMRR) y esclerosis múltiple progresiva (EMP), se encontró que en aquellos no tratados los porcentajes de células T nuevas en las células CD4+ y las células Vδ2– y Vδ1–Vδ2–Vγ9– en las células T γδ fueron superiores, mientras que el porcentaje de células T efectoras de memoria fue menor en los pacientes con EMRR que con EMP (p < 0.05 en todos los casos). No se encontraron otras diferencias significativas en otros subtipos celulares.
Figura 1. Correlación de los porcentajes de células T γδ Vδ2+ y Vδ2+ Vγ9+ con células Treg.
A-C) Correlación de los porcentajes de células T γδ Vδ2+ y células Treg entre células T de pacientes sanos (A), pacientes con esclerosis múltiple no tratados (B) y tratados con interferón beta (C).
D-F) Correlación de los porcentajes de células T γδ Vγ9+ y células Treg en pacientes sanos (D), pacientes con esclerosis múltiple no tratados (E) y tratados con interferón beta (F).
Discusión
Este estudio de inmunofenotipificación de linfocitos de sangre periférica encontró cambios relevantes en los subtipos de células T γδ y células B luego del tratamiento con IFN-beta. Este es el primer informe de un aumento en las células Vδ1–Vδ2–Vγ9– y una disminución en las células γδ Vδ2. Un estudio previo mostró una disminución de las células B de memoria de clase cambiada, que se confirma en este trabajo. El aumento en las células B de transición por IFN-beta en la EMRR fue confirmado al analizar estos pacientes por separado. En los sujetos tratados con IFN se encontró que las células B transicionales y nuevas eran superiores en los pacientes con EMRR, en comparación con EMP. Estos hallazgos son comparables con lo señalado por otros autores, y serían atribuibles a una mayor exportación tímica de células T CD4+ en la EMRR, en comparación con la EMP. Además, estas células se asocian de forma negativa con la edad, de forma contraria a las células T de memoria, que se correlaciona de forma positiva. La mayor edad observada en los pacientes con EMRR sería responsable por este cambio.
Uno de los resultados esperados fue que existiría un pequeño aumento en los porcentajes de células T Vδ1+Vδ2+Vγ9+ en los pacientes con EM no tratada debido al tratamiento con IFN-beta. Sin embargo, se encontró que el tratamiento aumentó las células Vδ1–Vδ2–Vγ9–, sin revertir la disminución del subtipo positivo ni la pérdida de una correlación positiva entre el subtipo positivo y las células Treg, observado en pacientes sanos. Las células Vδ1–Vδ2–Vγ9– tuvieron una correlación negativa con las células B de memoria cambiada, reducida por el tratamiento con IFN-beta. En los pacientes NEDA tratados con IFN-beta, las células Vδ1–Vδ2–Vγ9– tuvieron una correlación negativa con los puntajes de la EDSS, lo que sugiere que tendrían un papel protector contra la EM que no tendrían los subtipos las células Vδ1+Vδ2+Vγ9+.
El papel de las células Vδ3 como los subtipos antes mencionados estaría relacionado con la inmunomodulación, de una manera análoga a las células T natural killer (NK) que reconocen antígenos glucolipídicos presentados por moléculas CD1d. En diversos modelos animales de enfermedades inflamatorias y autoinmunes se encontró que las células T NK previenen la inflamación. Las células Vδ3 regulan la inmunidad adaptativa mediante la producción de citoquinas. En este trabajo, las células productoras de IFN-gamma disminuyeron, mientras que las productoras de IL-17 aumentaron. Por este motivo, es posible que las células Vδ1–Vδ2–Vγ9– tengan un papel en la inmunomodulación y la protección en pacientes tratados con IFN-beta.
La inmunofenotipificación amplia de linfocitos de sangre periférica de pacientes no tratados y tratados con IFN-beta, demostró que el tratamiento con este fármaco aumentó los porcentajes de células T γδ Vδ1–Vδ2–Vγ9– y disminuyó los de células B de memoria cambiada, sin influenciar en otros subtipos de células B y T, lo que contribuiría de alguna manera a atenuar la actividad de la enfermedad. Dado que las células γδ Vδ1–Vδ2–Vγ9– se asociaron con mejor resultado en pacientes con EM, serían un objetivo para la inmunomodulación farmacológica de dicha enfermedad.
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